特長
- 血漿中などから任意の方法で抽出した Cell Free DNA の濃度評価に使用するプライマー
- NGSライブラリー調整前にcfDNA濃度を測定することで適正なインプット量を決めることが可能
- 下記の標準的な20 µL反応系容量プロトコールでの使用想定で250反応相当
- cfDNA濃度測定評価には実績のあるプライマーで。 実際の使用例はこちら
標準的な20 μL の反応系容量のプロトコール
- qPCRの反応系１反応の容量：20 µL
- PCR Grade Water：5 µL
- Forward Primer (10 µM)：1 µL (Final Conc. 0.5 µM)
- Reverse Primer (10 µM)：1 µL (Final Conc. 0.5 μM)
- Master Mix (2x)：10 µL
- Sample Template：3 µL
PCR反応プログラム
- 50℃、2 min (120 sec) UNG活性化（UNGを使用しない場合は不要です。）
- 95℃、10 min (600 sec) 初期変性
- 以下を35cycles繰り返し（PCR増幅）
95℃、10 sec；
58℃、15 sec；
70℃、15 sec； ここでSYBR Green I 蛍光の検出を行ってください。
※ 基本的には、ご使用のMaster Mixの取り扱いに従ってください。
プライマー配列
- Amplicon Size: 82 bp
- Forward (5'→3') TCACTCAAAGCCGCTCAACTAC
- Revers (5'→3') TCTGCCTTCATTTCGTTATGTACC
※ 弊社のプライマーはすべてSalt Free Oligo™です。
参考文献
Rago, C. et al.
Serial assessment of human tumor burdens in mice by the analysis of circulating DNA. Cancer Research 67, 9364–9370 (2007)