シャローショットガンメタゲノムシーケンス(SSMS)
■サービス概要
2 Gb以下と比較的少ないデータ量で、16Sアンプリコンシーケンスとディープメタゲノムシーケンスの橋渡しとして用いられる、費用対効果の高いサービスです。
16Sアンプリコンシーケンスと比較してPCRバイアスが無く、増幅領域に制限されないため、種レベルの分類学的プロファイリングや細菌叢機能の解析において、精度が向上しています。
SSMSと16Sアンプリコンシーケンスの選択ガイド
SSMSがアンプリコンシーケンスより良い場合 |
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アンプリコンシーケンスがSSMSより良い場合 |
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SSMSにおけるデータ量の選択ガイド
1Gb = 宿主DNAの混入が非常に少なく、微生物の存在量が多いサンプルの場合 |
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例)健康な人/動物の正常な糞便由来のサンプル |
2Gb = 宿主のコンタミ度合い、微生物の存在割合が不明なサンプルの場合 |
例)ヒトのGIサンプルの場合、口腔内のスワブサンプル、または不健康な人の便由来サンプル |
■サービス仕様
- シーケンシング:NovaSeq X Plus
- 納品データ:fastqファイル形式
- 納品方法:データダウンロード(100 Gb未満)
本サービスは、ライブラリ調製+シーケンス+データ解析のセットメニューになります。
■ライブラリ調製方法
- イルミナ用 library prep kit によるライブラリ調製
■サンプル要件
- サンプルの状態:Genomic DNA
- サンプル量:200 ng以上
- 濃度:10 ng/µL以上
- 液量:20 µL以上
- 純度: OD260/280 = 1.8~2.0
サンプルの分解、RNAのコンタミがないこと
※ヒト/動物の消化器官系(GI)および糞便由来で、ホストのDNAの混入が50%以下のものに限る
■納期
- サンプルQC後 6週間(解析なしの場合)
■データ解析
- データ品質管理:低品質リードのフィルタリング、ホストゲノム配列のフィルタリング
- ゲノム配列(readfq、fqcheck、bowtie2)
- 生物種アノテーション(Kraken2)
- 種/遺伝子/機能エンリッチメント統計とクラスター解析、ヒートマップ PCA(NMDS、Krona、R)
- 比較解析(サンプル間)(Metastats、LefSe)