ライトサイクラー ファストスタートDNAマスター ハイブリダイゼーションプローブ

特長

• LightCycler® 2.0用 ファストスタートDNAマスター ハイブリダイゼーションプローブ（Probe用）
• ホットスタートPCR用マスターミックス
• ライトサイクラーのガラスキャピラリーでのホットスタートPCRに最適
• 簡便で高性能、また再現性が高くコンタミの危険性も最小限に
• テンプレートDNAとプライマー、HybProb、必要ならMgCl₂を加えるだけ
• PCRの間のキャリーオーバーを防止する熱感受性のウラシルDNAグリコシラーゼと組み合せて使用可能で、ツーステップRTPCRにも使用可能
• ライトサイクラー2.0 インスツルメントでDNAを増幅、検出するためのeasy-to-useの10×ホットスタート反応ミックスとMgCl₂、PCRグレード蒸留水から構成される。
• 酵素は75℃まで不活性で、95℃で活性化される。

背景

ライトサイクラーファストスタートDNAマスターハイブプローブは、ホットスタートPCR用マスターミックスです。
この製品はライトサイクラーのガラスキャピラリーでのホットスタートPCRに最適です。

ホットスタートPCRは、その特異性・感度・収量を飛躍的に改善します。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼのアミノ酸残基のいくつかに熱感受性保護基を付加する事で、室温では不活性な修飾酵素が作製されます。それゆえ、プライマーが非特異的に結合できる時期には伸長が起こりません。ファストスタートTaq DNAポリメラーゼは、例えば95℃で5-10分のプレインキュベーションステップでの高温で、保護基が除去される事により活性化されます。

HybProbeプローブはPCRのアニーリングステップで、増幅断片の内側にハイブリダイズする2種類の短いオリゴヌクレオチドより構成されます。一方のプローブは5'-末端がライトサイクラーRED(LC-Red640やLCRed705)で標識され、伸長を防ぐため3'-末端がリン酸化されます。他方のプローブは3'-末端がフルオレセインで標識されます。2つのプローブが近接してハイブリダイズした後にのみ、蛍光物質間に蛍光共鳴エネルギー転移(FRET)が起こります。FRETの間に、ドナー色素であるフルオレセインはライトサイクラーの光源により励起され、その励起エネルギーの一部をアクセプター色素であるライトサイクラーREDに転移します。ライトサイクラーREDのエミッションを測定します。

本キットは簡便で高性能、しかも再現性が良くコンタミネーションのリスクを最小限にします。ただ、テンプレートDNAとプライマー、HybProbe、それに必要ならMgCl₂を加えるだけです。

機能試験

ライトサイクラーコントロールキットDNAとその操作法で、試験済み

 

キット内容

1. ライトサイクラーファストスタート酵素
2. ライトサイクラーファストスタート反応ミックス、ハイブプローブ
3. MgCl₂ストック溶液、25 mM
4. 再蒸留水、PCRグレード