NGSライブラリー増幅キット (LAキット)

KAPA HiFi HotStart Library Amplification Kit (LA Kit)

（5） 3件のレビュー

よくあるご質問4件

PCRによって引き起こされるバイアスに対処し、シーケンスカバー効率の均一性を 向上させることを目的に開発されたキット

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お知らせ

特長

  • PCRによって引き起こされるバイアスに対処し、シーケンスカバー効率の均一性を 向上させることを目的に開発
  • ハイフィデリティーエンジニア酵素使用 (KAPA HiFi / KAPA SYBRFast)
  • アダプター結合後の増幅時にバイアスを低減すること可能で、シーケンスカバー率を向上
  • GCおよびATリッチゲノム領域の増幅率向上
  • 低GCおよびATリッチ領域でもバイアス発生低減
  • 2種類のキットから選択可能 (PCR法とリアルタイムqPCR法)
  • リアルタイムqPCR法では、時間のかかるゲル電気泳動が不要
  • 独自の酵素安定化剤により、凍結融解の影響はほとんどなし

参考文献1

英国 Wellcome Trust Sanger 研究所において、KAPA HiFi DNA polymerase（KAPA LibararyAmplificationKit）による NGSライブラリーのバイアス低減の有用性が検証されました。

(1)
Samuel O Oyola * et al., Optimizing Illumina Next-Generation Sequencing library preparation for extremely AT-biased genomes BMC Genomics 13:1, (2012)
*Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「Illumina社次世代シーケンシングにおけるATリッチなライブラリー調製の最適化」

(2)
Michael A Quail* et al., Optimal enzymes for amplifying sequencing libraries, Nature Methods 9,10 11 (2012)
*Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「次世代シーケンスにおけるライブラリー増幅に最適な酵素」

参考文献2

KAPA Biosystems社製品を用いて開発された”LIMprep法”が応用されている「高感度な単一細胞のRNA-Seq」に関する論文が発表されました。

Yohei Sasagawa, Itoshi Nikaido, Tetsutaro Hayashi, Hiroki Danno, Kenichiro D Uno, Takeshi Imai and Hiroki R Ueda,

Quartz-Seq: a highly reproducible and sensitive single-cell RNA-Seq reveals non-genetic gene expression heterogeneity, Genome Biology 2013, 14:R31 (doi:10.1186/gb-2013-14-4-r31) 

 

アプリケーションノート（国内実績）

理化学研究所 笹川洋平 様よりご提供いただいたLIMprep法に関するアプリケーションデータは、
本ページ上部「アプリノート」タブ内よりダウンロードいただけます。
下記から詳細プロトコールもご覧いただけます。

微量（0.1-10 ng）サンプルからのMultyplex Library Preparation Method
- LIMprep（Ligation based Illumina Multiplex library PREParation method） -

 

LIMprep詳細プロトコールはこちら

＊ご注意
Quarts-Seq（シングルセル RNA-Seq）におけるLIMprepのプロトコールは、精製ステップなどに若干修正が加えられた
Quarts-Seq専用のLIMprepプロトコールとなっております。
大変お手数ですが、Quarts-Seq全般に関するプロトコール（Quarts-Seq専用LIMprep含む）は、下記の
理化学研究所 情報基盤センターバイオインフォマティクス研究開発ユニットのプロトコールページよりダウンロードください。
https://bit.riken.jp/protocols/

参考文献3

Naomi Park* et al,
An improved approach to mate-paired library preparation for Illumina sequencing,
Methods in Next Generation Sequencing. Volume 1, Pages 10–20, ISSN (Online) 2084-7173, DOI: 10.2478/mngs-2013-0001, July 2013
*Wellcome Trust Sanger Institute, Hinxton, UK.
「Illumina社次世代シーケンシングにおけるメイトペア・ライブラリー調製法の改良」

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