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NGSライブラリー定量(LQ) キット

（KAPA Library Quantification Kits (LQキット)）

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製品概要

次世代DNAシーケンシングと次世代エンジニアqPCR用酵素の融合
信頼性の高い定量化法(qPCR法)により画期的な効率改善が得られます。
GC,ATリッチでも安定した結果をもたらします。
ロット間差を最小限に抑えたバリデーション済みDNA定量スタンダードが希釈済みで添付されています。（唯一のキット）
他の方法では得られない再現性
コストと細心の注意を払って調整されたライブラリーに最適なクラスター定量手法です。

1000回用スペシャルパッケージ

大変お得にご購入頂けるスペシャルパッケージがございます。

価格についてはページ下部のフォームよりお問い合わせください。

各種資料

日本語ガイドブック（取扱いのコツなど）
右側インデックス「取扱説明書」内より、操作方法ガイドをダウンロードください。
＊Illumina社用
＊LifeTechnologies社 Ion-Torrent用
＊Roche 454 FLX用
＊Roche 454 Titanium用

Efficiency Calculator
KAPA qPCR Efficiency Calculator（※）インストールファイルはページ上部「技術資料」をご覧ください。
取扱説明書（英語）はこちら

※KAPA Biosystems社から「qPCRの増幅効率」を簡便に計算できるソフトウェアが提供されました。
「スタンダードの”希釈倍率”と”Ct値”」を入力するだけで、qPCRの増幅効率：Efficiency(%)が簡便にチェックできます。KapaLibraryKitのみならず、リアルタイム定量qPCRで得られたスタンダードのCt値のチェックにご利用ください。

参考文献

KAPA Biosystems社製品を用いて開発された”LIMprep法”が応用されている「高感度な単一細胞のRNA-Seq」に関する論文が発表されました。

Yohei Sasagawa, Itoshi Nikaido, Tetsutaro Hayashi, Hiroki Danno, Kenichiro D Uno, Takeshi Imai and Hiroki R Ueda,

Quartz-Seq: a highly reproducible and sensitive single-cell RNA-Seq reveals non-genetic gene expression heterogeneity, Genome Biology 2013, 14:R31 (doi:10.1186/gb-2013-14-4-r31) http://genomebiology.com/2013/14/4/R31/abstract

アプリケーションノート（国内実績）

理化学研究所笹川洋平様よりご提供いただいたLIMprep法に関するアプリケーションデータは、
本ページ上部「アプリノート」タブ内よりダウンロードいただけます。下記より詳細プロトコールもご覧いただけます。

微量（0.1-10ng）サンプルからのMultyplex Library Preparation Method
- LIMprep（Ligation based Illumina Multiplex library PREParation method） -

●LIMprep詳細プロトコールはこちら

＊ご注意
Quarts-Seq（シングルセル RNA-Seq）におけるLIMprepのプロトコールは、精製ステップなどに若干修正が加えられた
Quarts-Seq専用のLIMprepプロトコールとなっております。
大変お手数ですが、Quarts-Seq全般に関するプロトコール（Quarts-Seq専用LIMprep含む）は、下記の
理化学研究所情報基盤センターバイオインフォマティクス研究開発ユニットのプロトコールページよりダウンロードください。
http://bit.accc.riken.jp/protocols/

備考

KAPAライブラリー定量キットのうち、Illumina用プラットフォームにつきましては
TruSeq Sample PrepKitにも適合することが確認されております。詳細はお問い合わせください。

仕様

スタンダードキット（500回用）内容

マスターミックス KAPA SYBR FAST qPCR Kit (2×) 5ml
ROX High / Low （※Universalタイプのみ）200ul x 各1本
プライマーミックス　　1ml
DNA定量スタンダード（6濃度）各80ul

スペシャルパッケージ（1000回用）キット内容

＝上記スタンダードキット × 2キット分

トライアルキット（KK4828/200回用）内容

マスターミックス KAPA SYBR FAST qPCR Kit (2×) 1ml x 2本
ROX High / Low　 200ul x 各1本
プライマーミックス　　200ul x 2本
DNA定量スタンダード（6濃度）　各80ul
※トライアルキットは、200反応分入りで6ライブラリー×2プレート分の評価が可能です。

保存条件

・-20℃で1年間（30回凍結融解可能）

無料デモ・サンプル・その他お問い合わせはお気軽に

製品によってはサンプルのご用意が無い場合もございます。予めご了承ください。

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オーダー情報

在庫あり（6個以上）
在庫わずか（1~5個）
販売中止
お問い合わせください
在庫無くなり次第販売中止
受注発注品
別途送料請求あり
返品不可

納期/出荷日について

月曜～金曜（土日祝日除く）14:30迄に販売店様よりご注文いただき弊社倉庫に在庫がある場合、基本的には当日出荷させていただきます。
弊社倉庫に在庫がない、もしくは何らかの事情で当日出荷ができない場合は、弊社よりご注文いただいた販売店様へ納期のご連絡をさせていただきます。
※冷凍品（-20℃）に関しては、原則として休前日（金曜日など）の出荷を行っておりませんのでご了承ください。（一部販売店様向けを除く）

CatNo.	概要	単位
プラットフォーム：Ion Torrent
KK4827	KAPA Library Quantification Kits 500回用 Ion Torrent / Universal	1キット
KK4827/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Ion Torrent / Universal	1キット
KK4838	KAPA Library Quantification Kits 500回用 Ion Torrent / ABI Prism	1キット
KK4838/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Ion Torrent / ABI Prism	1キット
KK4874	KAPA Library Quantification Kits 500回用 Ion Torrent / ROX Low	1キット
KK4874/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Ion Torrent / ROX Low	1キット
KK4847	KAPA Library Quantification Kits 500回用 Ion Torrent / Bio-Rad iCycler	1キット
KK4847/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Ion Torrent / Bio-Rad iCycler	1キット
プラットフォーム：Illumina
KK4828	KAPA Library Quantification Kits 200回用 Illumina / Universal トライアルキット	1キット
KK4824	KAPA Library Quantification Kits 500回用 Illumina / Universal	1キット
KK4824/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Illumina / Universal	1セット
KK4835	KAPA Library Quantification Kits 500回用Illumina / ABI PrismR	1キット
KK4835/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Illumina / ABI Prism®	1キット
KK4873	KAPA Library Quantification Kits 500回用 Illumina / ROX Low	1キット
KK4873/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Illumina / ROX Low	1キット
KK4854	KAPA Library Quantification Kits 500回用 Illumina / Roche LightCycler® 480	1キット
KK4854/D	KAPA Library Quantification Kits 500回用 x 2 スペシャルパッケージ Illumina / Roche LightCycler® 480	1キット
別売： DNA定量スタンダード
KK4904	Ion Torrent用 DNA定量スタンダード 80μｌ×6本	1セット
KK4903	Illumina用 DNA定量スタンダード 80μｌ×6本	1セット
別売：プライマープレミックス単品
KK4809	Illumina用プライマープレミックス v2 (1ml)	1キット
別売：プライマー・プレミックス／ qPCRマスターミックス KAPA SYBR Fast
KK4923	Illumina用プライマープレミックス (プライマープレミックス(10×)1ml, KAPA SYBR Fast Universal 5ml)	1セット
KK4953	Illumina用プライマープレミックス (プライマープレミックス(10×)1ml, KAPA SYBR FastRoche LightCycler® 480 5ml)	1セット

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製品によってはサンプルのご用意が無い場合もございます。予めご了承ください。

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FAQ

トラブル シュート illumin Truseq small RNA preparation Kitを用いてライブラリを作成したものをKAPA Library Quantification Kits(KK4824)を用いて定量PCRをしました。しかし、バイオアナライザーで測定されたライブラリの濃度は1.6nMであったのに対し、qPCRで得られプロトコル通りに算出したライブラリの濃度は40pMしかありませんでした。こんなに違うものなのでしょうか？: 今回の濃度の違いについては、可能性としてはあり得
るかと存じます。
（下記の「詳細」をご確認ください。）
私どものこれまでの経験でも、特にBioanalyzerとの差では、10-20倍程度でしたら、比較的よくある測定差のようです。
この場合、実際にはKapaLibraryQuantificationKitで定量した濃度のほうが正しかったとのコメントもいただいております。

なお、下記の本キットの操作ガイド5ページに記載されております「qPCRデータの検証」はいかがでしたでしょうか？
http://www.n-genetics.com/file/Kapa_LQKit_Operation_Guide_Illumina.pdf

こちらの検証でqPCRのデータの信頼性自体に問題がないようでしたら、ご心配ないかと存じます。
もしも、エクセル等でｑPCRデータの信頼性の検証、および濃度計算されていらっしゃるようでしたら、
そのデータだけでもお送りいただくことは可能でしょうか？
また、弊社技術担当者による出張デモによるサポートもご提案できます。
是非、ご検討のほど、よろしくお願いいたします。

（詳細）
qPCRデータの信頼性が高いのに、濃度に違いがみられる原因として、主に考えられる理由は以下の2点となります。
　１）　アダプター付加が不完全なライブラリーが多かったため。
　　　　Bioanalyzerでは、測定範囲内の全てのDNAが濃度として
加算されてしまいます。
　　　　一方、qPCRでは、ブリッジPCRで増幅できる完全な
ライブラリーのみが増幅し、定量されます。

　２）　Bioanalyzerの濃度測定機能の精度の低いレンジで測定
　したため。
　　　　お客様からいただいたコメントでは、BioanalyzerはDNA
　　　　濃度が濃過ぎる、または薄すぎると、測定精度が
　　　　下がる傾向がある、、、とのことです。
　　　　また、ゲル充填のバラつきに起因するランごとの誤差や、
　　　　個々のライブラリーでの泳動時の移動度の違いによる
　　　　誤差も見られる場合があるようです。
　　　　　一方のｑPCRの場合、どうしてもライブラリー希釈時の
　　　　分注誤差などが影響して来ますが、
　　　　こちらは、操作ガイドに記載しておりますような検証方法で
　　　　データの信頼性を検証し、確認することが可能です。

使用方法・ 技術的内容 illuminaのLibraryを定量しようと考えているが、以下のようなLibraryは定量に含まれるでしょうか？通常のLibraryはP5とP7の配列がInsertの両端にあるが（P5-insert-P7）、P5またはP7のどちらか一方のみが、Insertの片方にのみある場合（P5-insert or P7-insert）、又、Insertの両側にP5またはP7がある場合(P5-insert-P5, P7-insert-P7)は定量に含まれるでしょうか？: 結論から申し上げますと、本キットでは「通常のライブラリー（P5-insert-P7）のみ」が定量され、それ以外のイレギュラーなライブラリーは、基本的には定量いたしません。

（詳細）
本キットには下記のような配列のプライマーが使用されており、それぞれP5、P7にアニールするように設計されております。
　Primer P1: 5’-AAT GAT ACG GCG ACC ACC GA-3’
　Primer P2: 5’-CAA GCA GAA GAC GGC ATA CGA-3’
したがいまして、両端にそれぞれP5、P7のアダプター配列を持つDNAのみがアンプリコンとしてPCR増幅され、定量されます。
ご質問のようなケースでは、厳密にはプライマーがアニールすれば伸長反応にはつながるかと存じますが、アンプリコンとしては増幅されません。

製品仕様 Kapa Libraly Quantification kit の包装単位「500回用」の意味: スタンダードを含む測定キットのため、包装単位の記載方法がいろいろ可能となるため、分かり難くなってしまい申し訳ございません。

カタログ記載の500回用は、ご指摘通り500反応分の意味です。
　　　
qPCR試薬が5ml（5000uL）ですので（5000uL÷10uL試薬/反応 =500反応）となります。

補足：その他に「スタンダードDNAは何回分あるか？」のお問い合わせをよくいただきますのでご説明させていただきます。

スタンダードDNAは5 Run分となります。そのため、96well反応ｘ5 Run分（=約500反応）キットという言い方もできます。
測定するライブラリー量によって、スタンダードが先に無くなる場合は、別売りのスタンダードDNAをご購入ください。

（シーケンサー毎に製品が異なるため、詳細は下記webの価格表をご確認ください。）