アンピュアXP

FAQ

トラブル
シュート AMPureXPでPCR産物の回収率が期待どおりではありませんでした。 回収率を落とさないために注意するポイントがあれば教えてください。

（1）AMPureXPとPCR反応液の混合が不十分 ⇒ピペッティングによる混合では、ピペッティングの回数よりも混合方法にポイントがあります。 両方の溶液の比重は異なりますので、混合前には２種類の溶液は分離しています。 この時、チューブ底付近の比重が重いAMPureXPの層にチップ先端を固定したままピペッティングしても、なかなか上手く混合できません。 比重が重い下層のAMPureXPを吸引し、少しチップを持ち上げて比重が軽い上層のPCR反応溶液中で吐出するようにして、比重の異なる２種類の液体が上手く混ざるように混合してください。少しお手間ですが、これにより回収率はかなり改善されます。 （2）70％エタノールが適切に調製されていない ⇒ここが適切ではないと、洗浄工程で産物のロスにつながります。 我々の経験上も、以下の点をご注意いただくことで回収率が改善されることが多かったです。 1）なるべく新しい特級試薬のエタノールを用いて70％エタノールを調製します。 古くなると吸湿して、実際のエタノール濃度が低下していきます。 （実際に、ガロン瓶で、開封してから長期間使用されているようなケースで見られました。） 2）70％エタノールは、エタノールと蒸留水を別々に量り取ってから混合してV/V％調製します。 例えば、エタノール70mlと、蒸留水30mlを別々に量り取ってから、混合します。 このとき、最終容量は100mlよりも少なくなります。 （70mlのエタノールに蒸留水を加えていって100mlにメスアップしてしまうと、実際には70％以下になります。） 3）70％エタノールは都度調製して使用します。 上記の1）と同じ理由です。 （3）磁気ビーズ分離用マグネットの磁力が十分ではない ⇒マグネットの磁力が不十分ですと、以下のように精製操作中に磁気ビーズごとDNA産物をロスする原因となります。 ・磁気ビーズが速やかに完全に分離されないことで、溶液に残った磁気ビーズを吸引してしまう ・溶液を吸引する際に、磁気ビーズが剥がれ、一緒に吸引してしまう このため、磁力が十分な以下のマグネット製品をご使用ください。 特にMagnaStandシリーズは、日本国内で実際にAMPureXP製品を使用されているお客様のご意見を反映して開発した製品で、強力な磁力と使いやすい操作性で、大変ご好評をいただいております。 1）オリジナル製品 　A32782 SPRI 96 Super Magnet Plate 2）操作性を改良した国内開発製品（MagnaStandシリーズ） 　FG-SSMAG2 　NGS MagnaStand （YS-Model) 8Ch×0.2ml PCRチューブ用 　FG-SSMAG1.5 　NGS MagnaStand 8Ch × 1.5mlチューブ用 　FG-SSMAG96 　NGS MagnaStand （YS-Model） 96wellプレート用 　FG-SSMAG96SLV 　NGS MagnaStand （YS-Model） 96wellプレート用（微量対応モデル） 詳細はこちら http://www.n-genetics.com/product_detail.html?item_id=4608 （上記製品ページで実際の操作ムービーもご覧いただけます。）

使用方法・
技術的内容

サンプル溶液に混入すると「分画サイズ」や「回収量」に影響が出る成分には、どのようなものがあるでしょうか？

影響が知られている主な成分や要因と、その影響する内容は以下の通りです

・エタノール：回収量の低下、サイズセレクション時のブロード化（以下ブロード）
・グリセロール：回収量の低下
・MgCl2：ブロード
・PEG(ポリエチレングリコール)：ブロード
・pH：pHが3以下で回収量の低下

使用方法・
技術的内容

精製済みのRNAから逆転写した後、RNA/cDNA（ハイブリッドの状態）を精製したいと考えています。

RNAクリーンXP と アンピュアXPどちらを使用するのが良いのでしょうか？

逆転写反応後のcDNAのみが精製の対象でしたら、アンピュアXPをご使用ください。
一方、精製する対象としてRNAも重要でしたら、RNAクリーンXPをお勧めいたします。

RNAクリーンXPとアンピュアXPは、基本性能は同じです。
異なるのは、「RNAクリーンXP」がRNase フリーにて製造されており、
試薬製品にヌクレアーゼの混入がないことを品質確認している点となります。

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